圖示pIJ702是一種常用質體，其中tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗*基因；mel為黑*素合成基因，其表達能...

問題詳情：

圖示pIJ702是一種常用質體，其中tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗*基因；mel為黑*素合成基因，其表達能使白*的鏈黴菌菌落變成黑*菌落；而限制酶SacⅠ、 SphⅠ， BglⅠ在pIJ702上分別只有一處識別序列。回答下列問題。

表1

表2

“+”表示生長；“-”表示不生長。

（1）限制*內切核*酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷*序列，並使每條鏈中特定部位的兩個核苷*之間_______的斷裂，切割形成的末端有_______兩種。

（2）以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置換質體PIJ702上長度為0．4kb的SacⅠ/sphⅠ片段，構建重組質體pZHZ8。上述兩種質體的限制酶酶切片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為_____kb，判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是____________________________。

（3）導入目的基因時，首先用______處理鏈黴菌使其成為感受態細胞，再將重組質體pZHZ8溶於________中與感受態細胞混合，在一定的温度下可以促進鏈黴菌完成______過程。

（4）不含質體的鏈黴菌在含硫鏈絲菌素的固體培養基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pzHZ8的鏈黴菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應在______μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈黴菌的具體方法是________________________。

【回答】

    (1). **二酯鍵    (2). 黏*末端和平末端    (3). 1．4    (4). pIJ702上的原有BglⅡ位點被目的基因置換得到的環狀pZH28，仍能被BglⅡ切割成一條線段    (5). Ca2+    (6). 緩衝液    (7). 轉化    (8). 5    (9). 根據導入pIJ702的鏈黴菌菌落呈黑*、導入pZHZ8的鏈黴菌菌落呈白*的特點，通過觀察菌落的顏*進行挑選

【解析】

該題主要考察了基因工程的相關*作，基因工程的基本*作步驟為目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入到受體細胞、目的基因的檢測與鑑定。限制*核*內切酶主要作用於識別序列的**二酯鍵，切割完以後可能會產生黏*末端或者是平末端。將目的基因導入受體細胞時，常常使用Ca2+使得受體細胞成為感受態細胞。

【詳解】（1）限制*內切核*酶是作用於其所識別序列中剪切位點的**二酯鍵，不同的限制酶可以獲得不同的末端，主要分為黏*末端和平末端；

（2）由題幹可知，質體PIJ702上具有長度為0．4kb的SacⅠ/sphⅠ片段，使用SacⅠ和SphⅠ切取質體會多置換下0.4kb的片段，而BglⅡ在原質體和重組質體上的切割片段相差1.0kb，介於BglⅡ的識別位點位於SacⅠ和SphⅠ之間，所以推測目的基因的片段長度應該為1.0+0.4=1.4kb；在表格中可以反應出重組質體可以被BglⅡ限制酶切割，切割後稱為一條線段，但原有質體上的相關片段已經被SacⅠ和SphⅠ置換為目的基因，因此推測目的基因中也含有1個BglⅡ切割位點；

（3）將目的基因導入到受體細胞之前，需要將受體細胞用Ca2+處理使得受體細胞成為感受態細胞；然後重組質體要溶解到緩衝液中與感受態細胞融合；從而促進鏈黴菌完成轉化的過程；

（4）根據圖中的表格可知，要想對重組的鏈黴菌細胞進行篩選，應該滿足不含質體的鏈黴菌無法生長的要求，因此所需硫鏈絲菌素濃度至少應在5μg/mL以上；在該質體上存在一個mel基因，其表達的產物會使得白*的鏈黴菌菌落變成黑*菌落，所以導入pIJ702的鏈黴菌菌落呈黑*，而重組質體pZHZ8在構建的時候破壞了mel基因，所以該重組質體導入到鏈黴菌後菌落呈白*，後通過觀察菌落的顏*進行挑選。

【點睛】該題的難點在於基因表達載體的建構，由於切割位點及相對應的限制酶較多，所以準確分析目的基因及質體的長度和結構就對學生有一個綜合*的考察。而目的基因的檢測與鑑定則需要在理解以上重組質體的構建過程的基礎上分析標記基因的應用情況。

知識點：生物技術的安全*和倫理問題

題型：綜合題