基因表达载体的构建是基因工程的核心．图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目...

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基因表达载体的构建是基因工程的核心．图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒．请回答下列问题：

（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异*而言，切开的是　                                  之间相连的化学键．

（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是　          　．

A．若图中的ACT能决定一个氨基*，则ACT可称为一个密码子

B．DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处

C．若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种

D．就游离的**基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的**基

（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取         作为引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）．该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生等长的目的基因片段　    　个．

（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是                   　．如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有　  　种．

（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含　       　基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌．目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是　                       　．

【回答】

解：（1）DNA分子的一条多核苷*链中，两个脱氧核苷*之间以**基团和五碳糖相连．由题目可知，EcoRⅠ识别的DNA序列只有G和A，故切开的是鸟嘌呤脱氧核苷*和腺嘌呤脱氧核苷*之间相连的化学键．

（2）A、密码子是mRNA上决定一个氨基*的3个相邻的碱基，若图中的ACT能决定一个氨基*，则其对应的密码子是UGA，A错误；

B、DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②**二酯键处，解旋酶作用中①*键处，B正确；

C．A和T之间有2个*键，C和G之间有3个*键，因此若只用这片段中的3个碱基对，可以排列出23种片段，C错误；

D．就游离的**基而言，该片段有2个游离的**基，而重组质粒不含游离的**基，因此该片段与重组质粒相比多了2个游离的**基，D正确．

故选：BD．

（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，DNA复制只能从5’到3’，因此构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取 B和C 作为引物，该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生基因片段16个，其中等长的目的基因片段8个．

（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，四环素抗*基因没有被破坏，gu8 应该选择的限制酶是 PstⅠ、EcoRⅠ．如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，若Pst I酶的切割位点用1表示，EcoR I酶的切割位点用2表示，HindⅢ酶的切割位点用3表示，则形成的DNA片段1→2，2→1，2→3，3→2，1→3，3→1六种片段，其中只有2→1片段含有完整四环素抗*基因，即含有完整四环素抗*基因的DNA片段只有1种．

（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含 抗四环素基因   基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌．目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是 各种生物共用一套密码子．

故*为：

（1）鸟嘌呤脱氧核苷*和腺嘌呤脱氧核苷*

（2）BD 

（3）B和C   8 

（4）PstⅠ、EcoRⅠ1 

（5）抗四环素基因   各种生物共用一套密码子

知识点：生物技术的安全*和伦理问题

题型：填空题