圖1表示某細菌的質粒中相關限制酶的切割位點，圖2表示目的基因所在的DNA中相關限制酶的切割位點。請分析並回答...

問題詳情：

 圖1表示某細菌的質粒中相關限制酶的切割位點，圖2表示目的基因所在的DNA中相關限制酶的切割位點。請分析並回答下列問題：

(1) 用SmaⅠ限制酶處理圖1所示的一個質粒會得到種DNA片段，會增加個遊離的**基團。

(2)在實際*作中，最好選用 (填限制酶名稱)同時切割質粒和含目的基因的外源DNA，其優點是能避免目的基因和質粒在酶切後產生的片段發生自身環化或任意連接，以及便於篩選需要。一個目的基因透過PCR技術擴增第n次，需要個引物。

 (3) 爲了篩選獲得含有重組質粒的大腸桿菌，實驗人員首先將經轉化處理過的大腸桿菌接種在含 (抗生素)的培養基*中，然後用影印法將該培養基上的菌落按原來的方向印在含 (抗生素)培養基乙上，以篩選獲得含重組質粒的細菌。含重組質粒的大腸桿菌在兩種培養基的生長情況是。

(4) 經檢測：在上述匯入了重組質粒的大腸桿菌菌株中，目的基因正常轉錄形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白質卻並不具有生物活*，最可能的原因是。

【回答】

（1）           圖1質粒有SmaⅠ限制酶兩個切割位點，用SmaⅠ限制酶切割該質粒會得到2種2個DNA片段，每個DNA片段有2個遊離的**基團，所以產生兩個DNA片段會增加4個遊離的**基團。

（2）           從圖2可知，目的基因的右側可用PstⅠ限制酶切割，目的基因的左側可用SmaⅠ限制酶或HindⅢ限制酶切割，但用SmaⅠ限制酶切割質粒時會破壞兩個標記基因，不利於篩選。所以，最好選用Pst Ⅰ和Hind Ⅲ酶同時切割質粒和含目的基因的外源DNA，其優點是能避免目的基因和質粒在酶切後產生的片段發生自身環化或任意連接，以及便於篩選需要。

    1個DNA分子複製第n次*生了2n個DNA分子，由於DNA分子爲半保留複製，其中新合成2個DNA單鏈，每條新鏈的合成需要1個引物，所以一個目的基因透過PCR技術擴增第n次，需要2n個引物。

（3）普通質粒含有*黴素和四環素抗*基因，重組質粒只含有四環素抗*基因，所以在含四環素培養基中能生長繁殖，而在含*黴素培養基中不能生長繁殖的菌落即爲含重組質粒的細菌。

（4）大腸桿菌細胞內缺乏內質網與高爾基體(或大腸桿菌缺乏生物膜系統)，不能對多肽鏈進行摺疊、組裝與修飾，所以匯入了重組質粒的大腸桿菌菌株中，目的基因正常轉錄形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白質卻並不具有生物活*。

【*】(1) 2　4　(2) Pst Ⅰ和Hind Ⅲ酶　  2n   

(3) 四環素　*黴素  

 在含四環素培養基中能生長繁殖，而在含*黴素培養基中不能生長繁殖

(4) 大腸桿菌細胞內缺乏內質網與高爾基體(或大腸桿菌缺乏生物膜系統)，不能對多肽鏈進行摺疊、組裝與修飾

知識點：生物技術的安全*和倫理問題

題型：填空題