為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位於葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜葉片細胞並獲得了轉基因...

問題詳情：

為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位於葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜葉片細胞並獲得了轉基因油菜品種．

（1）從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因，然後利用　         　技術分別進行擴增．

（2）如圖1，選用圖中的限制酶     　處理兩個基因後再用    酶處理，得到　      （填圖中字母）端相連的融合基因．

（3）將上述融合基因*入圖2所示Ti質體的T﹣DNA中，構建　       　並導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含　        　的固體平板上培養得到單菌落，再利用液體培養基震盪培養，得到用於轉化的浸染液．

（4）剪取油菜的葉片放入浸染液中一段時間，此過程的目的是　                ，進一步篩選後獲得轉基因油菜．

（5）用DNA﹣RNA分子雜交技術確定融合基因是否完成了　    　（轉錄、翻譯）．

【回答】

解：（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，採用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因．

（2）在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖*所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因後，得到A、D端相連的融合基因．

（3）將上述融合基因*入圖乙所示Ti質體的T﹣DNA中，構建表達載體即重組質體並導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含四環素的固體平板上培養得到單菌落，再利用液體培養基震盪培養，可以得到用於轉化的浸染液．

（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入受體細胞，進一步篩選後獲得轉基因油菜細胞．該細胞通過植物組織培養技術，可培育成轉基因油菜植株．

（5）用DNA﹣RNA分子雜交技術確定融合基因是否完成了轉錄，產生了mRNA；用抗原﹣抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

故*為：

（1）PCR（聚合酶鏈式反應/多聚酶鏈式反應）

（2）ClaⅠDNA連接   A、D

（3）基因表達載體      四環素

（4）將目的基因導入受體細胞

（5）轉錄

知識點：生物技術的安全*和倫理問題

題型：填空題