問題詳情：
如圖所示為三種質粒和一個含目的基因的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨苄青黴素抗*基因，Tc為四環素抗*基因，lacZ為藍*顯*基因(能使含該基因的大腸桿菌菌落呈藍*)。圖中EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶，括號內的數字表示限制酶切割位點與複製原點的距離。請據圖分析並回答問題：
（1）若需獲得圖中目的基因，可選用________限制酶。
（2）片段D是目的基因中的某一片段，下列敘述錯誤的有________(填字母)。
a．該圖中含有兩個密碼子
b．圖中③和④代表兩個不同的脫氧核苷*
c．若只用該片段中的3個鹼基對，可以排列出43種片段
d． DNA聚合酶和DNA連線酶都可作用於②處，解旋酶作用中①處
（3）圖中最適合作為目的基因運載體的質粒是B，而A、C兩種質粒不能作為運載體的理由分別是________。
（4）用目的基因和質粒B構建重組質粒後用EcoRⅠ完全酶切並進行電泳觀察，可出現長度為1．1 kb和________kb，或者________kb和________kb的片段。(重組質粒上目的基因的*入位點與EcoRⅠ的識別位點之間的鹼基對忽略不計)
（5）將分別用限制酶PvuⅠ切開的質粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連線酶連線後，並進行匯入大腸桿菌受體細胞的*作之後，從菌落的顏*和對抗生素抗*的角度分析，受體細胞的型別有________種。若菌落表現為具有氨苄青黴素抗*、不呈藍*，說明匯入對應受體細胞的DNA為_______________________。
【回答】
PvuⅠ abc A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，複製原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主複製 5．6 3．1 3．6 3 重組質粒(或質粒B—目的基因連線)或質粒B—質粒B反向連線
【分析】
DNA分子雙螺旋結構的主要特點：
DNA分子是由兩條鏈組成的，這兩條鏈按反向平行方式盤旋成雙螺旋結構。
DNA分子中的脫氧核糖和**交替連線，排列在外側，構成基本骨架；鹼基排列在內側。
兩條鏈上的鹼基通過*鍵連線成鹼基對，並且鹼基配對有一定的規律：A(腺嘌呤)一定與T(胸腺嘧啶)配對；G(鳥嘌呤)一定與C(胞嘧啶)配對。鹼基之間的這種一一對應的關係，叫做鹼基互補配對原則。
作為運載體的質粒需要具備的特徵
能夠在宿主細胞中複製並穩定儲存；具有多個限制酶切點；具有某些標記基因便於進行篩選。
所以，質粒在基因工程中經常被用作運載體，作為運載體的質粒都是經過人工改造的。
【詳解】
（1）圖中目的基因的兩端有PvuⅠ限制酶的切割位點，故若要獲得圖中目的基因，可選用PvuⅠ限制酶來進行切割。
（2）片段D是目的基因中的某一片段，下列敘述錯誤的有:
a．基因是有遺傳效應的DNA片段，密碼子在mRNA上，故該圖中沒有密碼子，a錯誤；
b．圖中③是一種脫氧核苷*，而④不代表兩脫氧核苷*，b錯誤；
c．若只用該片段中的3個鹼基對，可以排列出33種片段,c錯誤；
d．DNA聚合酶和DNA連線酶都可作用於**二酯鍵，即②處，解旋酶作用中*鍵，即①處，d正確。故選abc。
（3）作為運載體的質粒必須具有標記基因，而且需要有多個限制酶切點，複製原點也是構建基因表達載體必須具備的，而質粒A中缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，複製原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主複製，故圖中最適合作為目的基因運載體的質粒是B。
（4）析圖可知，目的基因上存在著EcoRI酶的切割位點，構建重組質粒時使用PvuI，重組質粒長度為2.7+4=6.7kb，目的基因可正向或反向連線到質粒上。使用EcoRI切割之後進行電泳檢測。若電泳圖譜中出現長度為1.1kb(0.8-0.7+1.0)和5.6kb或者3.1kb和.3.6kb的片段，故用目的基因和質粒B構建重組質粒後用EcoRⅠ完全酶切並進行電泳觀察，可出現長度為1．1 kb和5.6kb，或者3.1kb和3.6kb的片段。
（5）將分別用限制酶PvuⅠ切開的質粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連線酶連線後，由於用相同的限制酶切割質粒和目的基因，故兩者產生相同的黏*末端，在連線酶的作用下會出現兩兩連線的三種環狀，即重組質粒、目的基因—目的基因連線或質粒B—質粒B反向連線三種類型，匯入大腸桿菌受體細胞之後，獲得3種類型的受體細胞，從菌落的顏*和對抗生素抗*的角度分析，若菌落表現為具有氨苄青黴素抗*、不呈藍*，說明匯入的DNA中含有抗氨苄青黴素的基因，同時不含有lacZ基因，可推知匯入對應受體細胞的DNA為重組質粒(或質粒B—目的基因連線)或質粒B—質粒B反向連線。
【點睛】
熟知相關的基本知識並能利用基本知識進行辨圖是解答本題的關鍵！對基因工程中關鍵步驟的考查是本題的重要考點，第二小題是本題的易錯點。
知識點：基因工程
題型：綜合題
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