GDNF是一種神經營養因子，對損傷的神經細胞具有營養和保護作用．研究人員構建了含GDNF基因的表達載體（如圖1...

問題詳情：

GDNF是一種神經營養因子，對損傷的神經細胞具有營養和保護作用．研究人員構建了含GDNF基因的表達載體（如圖1所示），並導入到大鼠神經幹細胞中，用於幹細胞基因治療的研究．請回答： （1）構建含GDNF基因的表達載體時，需選擇圖1中的        限制酶進行酶切．  （2）經酶切後的載體和GDNF基因進行連接，連接產物經篩選得到的載體主要有3種：單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖1所示）．為鑑定這3種連接方式，選擇HpaⅠ酶和BamHⅠ酶對篩選得到的載體進行雙酶切，並對酶切後的DNA片段進行電泳分析，結果如圖2所示．圖中第            泳道顯示所鑑定的載體是正向連接的． （3）將正向連接的表達載體導入神經幹細胞後，為了檢測GDNF基因是否成功表達，可用相應的        體與提取的蛋白質雜交．當細胞培養的神經幹細胞達到一定密度時產生接觸抑制，換瓶後進行            培養以得到更多數量的細胞，用於神經幹細胞移植治療實驗．      （4）對於神經幹細胞可以來源於胚胎幹細胞的誘導分化，胚胎幹細胞來源於            ，在培養時可以只*不分化，但是通過誘導可以分化成各種不同的組織細胞，胚胎幹細胞的這個特*稱為                   ． （5）胚胎幹細胞也可以來自於核移植的重組細胞，一般體細胞核移植要比胚胎細胞核移植難度大，原因是                           ，而取自卵巢的卵母細胞需要培養到          期，才可進行核移植．

【回答】

解：（1）質體上有XhoⅠ識別位點，而且在啟動子之後，所以選用XhoⅠ限制酶進行酶切． （2）泳道①僅有一種條帶，屬於載體自連；泳道②有兩種條帶，且長度分別與質體和GDNF基因長度相同，為正向連接；泳道③有兩種條帶，長度與BamHⅠ酶切後結果相同，為反向連接． （3）檢測基因是否表達採用抗原抗體雜交法．培養動物細胞採用動物細胞培養法，當細胞密度達到一定程度，需要進行分瓶，進行傳代培養． （4）對於神經幹細胞可以來源於胚胎幹細胞的誘導分化，胚胎幹細胞來源於原始*腺和早期胚胎，在培養時可以只*不分化，但是通過誘導可以分化成各種不同的組織細胞，胚胎幹細胞的這個特*稱為發育的全能*． （5）胚胎幹細胞也可以來自於核移植的重組細胞，一般體細胞核移植要比胚胎細胞核移植難度大，原因是細胞分化程度大，細胞核不易實現全能*，而取自卵巢的卵母細胞需要培養到MⅡ中期期，才可進行核移植． 故*為： （1）XhoⅠ （2）② （3）抗體    　傳代 （4）原始*腺和早期胚胎       發育的全能* （5）細胞分化程度大，細胞核不易實現全能*      MⅡ中期

知識點：胚胎工程

題型：填空題