徑柳匙葉草是一種泌鹽植物。科研工作者將徑柳匙葉草液泡膜Na+/K+逆向轉運蛋白基因（TaNHX2基因）轉移到棉...

問題詳情：

徑柳匙葉草是一種泌鹽植物。科研工作者將徑柳匙葉草液泡膜Na+/K+逆向轉運蛋白基因（TaNHX2基因）轉移到棉花細胞內，獲得了轉基因耐鹽棉花新品種。圖1是獲取的含有目的基因的DNA片段，Sau3AI、EcoRI、BamHI為三種限制酶，圖中箭頭所指為三種限制酶的切點；圖2是三種限制酶的識別序列與酶切位點示意圖；圖3是土壤農桿菌中用於攜帶目的基因的Ti質體結構示意圖，請分析回答問題：

（1）將含有徑柳匙葉草不同基因的DNA片段導入受體菌的羣體中儲存，再根據TaNHX2基因的特定核苷*序列從中提取圖1的片段，此法為從__________獲取目的基因。

（2）不能在徑柳匙葉草根尖分生區細胞中獲得TaNHX2基因的mRNA，其原因是______________________________。

（3）若用BamHI切割圖1所示的DNA片段，獲得目的基因，則需選用_______切割圖3所示質體，以便構建基因表達載體，該方案的缺陷是_________。故切割圖1所示DNA片段的最佳方案是選用____________酶。

（4）用上述最佳方案構建基因表達載體，所得重組質體____________（選填“能”“不能”或“不一定能”）被BamHI切割。

（5）圖3中，質體上的抗生素抗*基因的作用是_________________________________。

（6）為了檢測技術成果，科研工作者將轉基因棉花種植在鹽鹼地，觀察其生長狀況，這屬於___________________________水平的檢測。

【回答】

基因文庫中    基因的選擇*表達（徑柳匙葉草根尖分生區細胞中TaNHX2基因不能表達）    Sau3A I    出現目的基因和質體的自我環化、目的基因在質體上的連接方向不確定    EcoRI和BamH I    不一定能    以便篩選出含有目的基因的受體細胞    個體   

【分析】

基因工程技術的基本步驟：

1.目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

2.基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

3.將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因*法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注*法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

4.目的基因的檢測與鑑定：

（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染*體的DNA是否*入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。

（2）個體水平上的鑑定：抗蟲鑑定、抗病鑑定、活*鑑定等。

【詳解】

（1）根據題意分析，該獲取目的基因的方法是將不同基因的DNA片段導入受體菌的羣體中儲存，再根據TaNHX2基因的特定核苷*序列從中提取圖1的片段，因此該方法為從基因文庫中獲取目的基因。

（2）由於細胞中基因是選擇*表達的，而徑柳匙葉草根尖分生區細胞中TaNHX2基因不能表達，因此不能在徑柳匙葉草根尖分生區細胞中獲得TaNHX2基因的mRNA。

（3）已知切割圖1所示的DNA片段的限制酶是BamHI，因此切割目的基因的限制酶應該是BamHI或者是切割後能夠產生相同粘*末端的限制酶，圖2顯示BamHI與Sau3A I切割後產生的粘*末端相同，而圖3質體又沒有BamHI識別位點，因此只能用Sau3A I切割質體；該方案切割後，目的基因兩側的粘*末端以及質體的兩個粘*末端相同，可能會引起目的基因和質體的自我環化、目的基因在質體上的連接方向不確定等情況；為了防止這種現象的出現，我們應該選擇不同的限制酶切割目的基因的兩側以及質體，結合圖1和圖3分析，應該選擇EcoRI和BamH I切割圖1所示DNA片段，EcoRI和Sau3A I切割圖3質體。

（4）結合以上分析可知，形成的重組質體上肯定含有EcoRI、Sau3A I的識別位點，不一定含有BamH I的識別位點，所以所得重組質體不一定能被BamHI切割。

（5）圖3中，質體上的抗生素抗*基因為標記基因，其作用是篩選出含有目的基因的受體細胞。

（6）科研工作者將轉基因棉花種植在鹽鹼地，觀察其生長狀況，屬於個體水平上的檢測。

【點睛】

本題結合基因結構圖和運載體結構圖，考查基因工程的技術和原理，重點是限制酶作用及其特點、質體的組成等，要求考生認真分析圖1、圖2和圖3，能根據圖中信息選擇合適的限制酶，再運用所學的知識答題。

知識點：基因工程

題型：綜合題